一、操作规程

1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜；

2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟；

3. 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统；

4. 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单；

5.有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min；

6.调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况；

7.设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀、泵、检测器等。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：（1）进样前的稳流，一般2-5分钟；（2）基线归零；（3）进样阀的loading-inject转换；（4）走样时间，随不同的样品而不同。

8.进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再按上述方法走一段基线，洗掉剩余物。

9.关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10.填写登记本，由负责人签字。

二、注意事项

1.流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡；

2.分析柱非常脆弱，首次使用时请按分析柱使用说明操作；

3.所有用于分析的液体均需严格过滤；

4.压力不能太大，最好不要超过2000 psi。