一、操作规程

1.开机

电脑启动完全后，打开DA7600PCR仪电源开关，预热5分钟。

2.创建荧光定量PCR检测文件

（1）双击DA7600软件图标。按实验需要在电脑上设定一个新的运行程序，即按PCR试剂说明书在程序参数中设计新的温度参数和扩增程序，具体如下：

l 在左下角程序段点击“添加”，在下方输入程序名（如A或预变性等），循环数1，在程序节输入目标温度（如93℃）和恒温时间（如00:02:00）；

l 在左下角程序段继续点击“添加”，在下方输入程序名（如B或扩增1等），循环数10，在程序节编号1输入目标温度93℃和恒温时间45秒，在程序节点击“添加”，在编号2继续输入目标温度55℃和恒温时间1分钟；

l 在左下角程序段继续点击“添加”，在下方输入程序名（如C或扩增2等），循环数30，在程序节编号1输入目标温度93℃和恒温时间30秒，在程序节点击“添加”，在编号2继续输入目标温度55℃和恒温时间45秒,并选择读取荧光；

l 在左下角选择自动热盖，加液量选择50ul。

（2）新的样本参数的设定，包括标准、阴阳性对照、质控和未知样本，并选择染料类型（一般实验只选择FAM即可），再保存文件到指定文件夹，点（

）“开始运行”实验；

（3）实验结束后，保存实验文件，关闭PCR仪电源开关。

3.实验结果分析：

（1）结果曲线的分析，选择自动分析，然后按以下步骤进行：全部曲线→阴性对照→阳性对照→阳性室内质控品→阳性标准品→未知样本逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）。如不理想可选择手动分析，调整基线和阈值线的参数，获得较好的标准曲线（斜率、截距和相关性系数均在正常范围），显示定量结果→登记→发临床报告。另外根据需要在文件一栏中选择相应的格式导出数据，并保存在指定文件夹；

（2）如果有特殊结果曲线，需要复查（可疑结果）或者样本稀释后（超高浓度样本）重新测定结果。

二、维护方法

1.电脑工作站的维护

硬盘驱动器每月最后一个工作日运行一次碎片整理和清除程序，并重新启动计算机。

2. PCR仪的维护

（1）锥孔的清洁

锥孔每月最后一个工作日进行一次清洁，如出现锥孔污染情况则随时清洁。操作方法：定期用无菌棉签沾少量无菌蒸馏水清洗模块上的锥孔以保证扩增管与锥孔壁接触充分，导热良好，避免污染。

（2）热盖的清洁

热盖每月最后一个工作日进行一次清洁，如有需要则随时进行。

（3）仪器表面的清洁

本仪器表面如有污迹，可用软布蘸清洁剂进行擦拭。

3.分析系统校准

（1）光路校准：由仪器厂家或专业工程师定期（一年）校准；

（2）荧光背景校准：开启核酸扩增荧光检测仪电源，以空白扩增管代替样品扩增管观察背景荧光，如有显著荧光偏强或偏弱，则表示激发光源偏强或偏弱，在实验前需要对激发光源的增益值进行调节，达到实验最佳需求；

（3）荧光校准：根据实验要求，用空白试剂作为参照定期在系统参数的增益设置对相应的工作通道进行增益调节，以达到最佳实验需求；

（4）仪器经过校准后，运行预实验，结果归入仪器档案。

4. SOP的变动程序

本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报负责人，由负责人决定，如通过则公布实行。

三、注意事项

1.仪器应放置在水平坚固的平台上，外界电源系统电压要匹配，并保证其可靠接地；

2.环境温度保持在18-25℃左右，湿度保持在60％左右；

3.仪器应配备功率≥2000W的稳压器；

4.仪器使用时应严格遵守上述使用步骤，并定期清洁维护。